一份准确的核酸报告这样诞生

检验人员为样本编号并录入信息

在PCR仪上进行的扩增检测，要历时约一个半小时 本报记者 徐程 摄

本报记者 郜阳

这两天，经历了第一批“网格化”筛查的市民发现，有些小区已经重新进入“决赛圈”，有些延长了管控时间。其中起到关键作用的，是一份份核酸报告。

对于市民来说，核酸检测看似只有两步：登记采样，等待数小时后在健康云App上查询结果。事实上，这背后凝聚了基因扩增实验室（PCR实验室）检验人员的大量工作。

采样后，标本经历了怎样的“奇幻漂流”之旅？本报记者近日走进同济大学附属东方医院南院检验科PCR实验室，听吴文娟主任揭秘一份准确的核酸报告是如何诞生的。

标本转运签收

环节：清点密封消毒

“医生，我今天在你们医院做的核酸什么时候有结果呀？还要多久呀？”

“医生，我急需核酸报告，能加急帮我检测一下吗？”

这几天，申城各医疗机构的医务人员总会接到这样的问询电话。很多人想象，核酸采样后，直接用机器检测很快就能出结果了。但其实，自从采样护士在你的鼻部或咽部“轻捻慢拢”后，还要经过标本签收、核酸提取、核酸转移、核酸扩增、结果审核等步骤。

核酸检测样本采集后，采集人员会清点数目，并用密封袋包装好，用消毒剂喷洒消毒，然后放进标本转运箱，由专人送到核酸检测实验室。检测人员收到样本后会先对转运箱消毒，并在开启后对转运箱内壁和标本采集密封袋二次消毒，随后拆开密封袋取出样本。

“核酸的采集管上都有条码信息，签收人员要理清标本来自哪一个社区或人群，是单采还是混采。”吴文娟表示，“另外，我们还会留意标本上的时间，便于日后需要时回溯。”

赋予“身份证”

要点：识空管防溢洒进负压

之后，核酸标本就将经历“奇幻漂流”的第二步——要有“身份证”啦！检验人员则将这一步称为“标本前处理”。“PCR反应是在96孔板上实现的，每一个孔位都该有自己独一无二的身份。”吴文娟说。

看似只是“前处理”，但防备之心可是一点儿也不能松。检验人员要识别空管或溢洒情况的发生。尤其在大人群10:1混采时，小小的试管被拭子挤满，一旦阳性标本出现了溢洒，一方面可能造成其他标本结果的污染（假阳性），另一方面会对实验室的生物安全产生威胁——这是PCR实验室的检验人员同样要穿成“大白”模样的原因——医用帽子、N95口罩、面屏、护目镜、医用防护服、隔离衣、一次性鞋套、两层手套，有了这些“束缚”，才能给检验人员创造最安全的环境。

此外，PCR实验室要求严格分区，最好是负压实验室。空气流动只会从外向内，那么实验室里的污染就不会扩散到外界，可以保证实验室外面的安全。

PCR加样

目标：“揪出”遗传物质

拿到“身份证”的核酸标本并不能直接测试，而是要先提取核酸，对其进行扩增。因此，核酸标本“奇幻漂流”的下一站，是PCR加样区——简单来说，检验人员要把病毒的遗传物质（核糖核酸）给“揪出来”。

检验人员戴着双层手套，在生物安全柜内一管一管地拧开螺旋盖，手工吸取样本，加入核酸提取板孔中，再拧上螺旋盖将标本放回原处。

“有多少份样本就有多少次的重复操作。”吴文娟说。那时，检验人员与新冠病毒“擦肩而过”的距离可能只隔着两层乳胶手套——也就是2毫米，但核酸检测工作不允许他们害怕。

获得核酸后，检验人员用移液枪将核酸转移至事先准备好反应液的反应管里，制成反应体系，让它进入“奇幻漂流”的下一站：扩增分析区。

“不能出错，不能有遗漏，不能发生生物安全事故。可以说检验人员全身时刻处于高度紧张的状态。就单说‘加样’，检验人员要用极小的枪头将每个提取好的核酸，大概是一滴水的四分之一加入到试剂中，每一步操作都必须十二分地谨慎。”吴文娟告诉记者，“我们迫切希望能有开盖、加样的仪器来‘解放’检验人员，可现有的仪器在速度上并不能令人满意，遇上大样本筛查只能靠手工操作。”

核酸扩增

关键：开弓没有回头箭

经历了复杂费时的前期制备过程，样本终于来到了“奇幻漂流”的关键一站。样本的采样质量如何、核酸提取的质量如何、结果如何都将在此处见分晓。

这里不得不提一下曾斩获诺贝尔奖的聚合酶链反应（PCR），这是上世纪80年代中期发展起来的一项体外核酸扩增技术，它可以将目标基因片段于数小时内扩增百万倍至数亿倍，成为当今生命科学研究最为重要且广泛使用的技术手段之一。

怎么理解扩增？如果把标本提取出来的核酸看作是一块土地，新冠病毒是种子，如何知道土地里有没有种子？简单的方法是，加点水和肥料（试剂），让种子一个变两个、两个变四个、四个变八个……“病毒是看不到的，而且微量标本也不容易检测到，所以要让它变多，才方便检测出来。”吴文娟解释。

当反应管在机器上开始检验后，也就意味着“开弓没有回头箭”——从采样到核酸制备，任何一个环节出现问题都可能导致返工重测，从而使报告时间加倍。

3月15日，国家卫健委发布《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）》。其中，《方案》将解除隔离管理和出院标准修改为“连续两次新型冠状病毒核酸检测N基因和ORF基因CT值均≥35（荧光定量PCR方法，界限值为40，采样时间至少间隔24小时）”，这儿的“CT”是指扩增的阈值。“简单来说，CT值越低，说明阳性越强；CT值越高，说明阳性越弱。”

作为初筛实验室，只能向疾控中心报告“疑似阳性”。“我们会将CT值登记报告，上报相应区域的疾控部门。随后根据疾控的要求转运原管标本以供复核。”吴文娟说，PCR实验室也会通过紫外线消毒。据介绍，通常阴性标本会储存一两天以备查验。

结果审核

标准：确保无误报结果

走到这，核酸标本的“奇幻漂流”之旅并没有结束。检测人员需要对扩增结果进行分析：包括同批随样本检测的阴阳性质控结果是否在控、基线设置、逐孔分析内标及样本结果是否正常等。当阴阳性质控全部符合检测要求，排除假阴性、假阳性可能，对异常结果样本及时进行复核，确保无误后才能最终报告结果，并上传到健康云。

有人好奇，健康云核酸结果查询里，“OFR1a/b阴性，N基因阴性”是什么意思？吴文娟解释，这是新型冠状病毒核酸的两个特异性片段，“一般同一份标本中两个基因检测结果均为阳性，会判断为阳性，单基因阳性则需复检。”

“现在我们检验科的工作包括了‘愿检尽检’——市民需要核酸阴性报告这张‘通行证’的；‘应检尽检’——住院患者和陪护，还有医院承担的密接、次密接及高风险人群的核酸检测。这几天，还有‘网格化’筛查的任务。”吴文娟的语气里透露着疲惫。

仪器运行时，检测人员也不能轻松一会儿，此时，新的一批标本又来了。吴文娟说，检验人员一直在超负荷运转。“防护服是不透气的，全身罩在里面，刚穿上就会很热。加之机器一刻不停，热量积聚一天后整个实验室会非常闷热，即使开着空调，室内温度也会达到28℃-30℃。此外，实验室里静电也很强烈，因此也特别干燥。”她说，“我们中的很多人已经连续几天都没有回过家了，大家都是‘5+2’‘白+黑’的节奏在工作，能够躺下来休息一会，就觉得很满足了。”